薄層色譜TLC實驗操作程序及其基本技術

1.薄層色譜TLC的制備：分軟板和硬板兩種。鋪板，一般取一份吸附劑加兩份水，研磨調成糊狀，涂布，厚度一般為0.3-0.5nm，一塊5×20cm板約需3g吸附劑。室溫下晾干，于105－110℃活化0.5-1小時，置干燥器內備用，1周內可使用，超出1周，用前需再次活化，不主張反復活化，長期使用。  

2.供試品溶液的制備：按規定的方法制備。

3.對照品溶液及對照藥材溶液的制備：按規定的方法制備。  

4.點樣  

(1).直接點樣法：點樣量一般不超過10ul，點樣時不要損傷薄層板表面，宜分次點加，直徑不要超過4mm，點樣基線距底邊為1.0-1.5cm，距兩邊不少于1.0cm，兩個樣點距離可視斑點擴散以不影響檢出為宜，一般為1.5-2.0cm，點樣基線與薄層板地邊平行。  

(2).濾紙移樣法：薄層板上打孔，另取大小相同的濾紙，置針尖上，點樣，將濾紙置挖好的小孔上，要求吻合良好。  

5.展開劑的制備：按比例配制，現配現用。  

6.層析缸的飽和：為使Rf值重現性良好，展開劑置于層析缸中，缸壁貼上兩條高、寬適宜的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂的蓋，室溫放置1小時左右，俟展開劑揮發，使系統平衡。  

7.薄層板的預飽和：克服邊緣效應以及改善分離效果，Rf值重現性良好。  

8.展開：水平展開和垂直展開，浸入深度距底邊0.5－1.0cm，距原點5mm為宜，切勿將樣點浸入展開劑中，展距以7－15cm為宜，展距過大，斑點擴散，度差，展距過小，分離效果差。  

9.顯色

(1).蒸氣顯色法：常用揮發性的酸、堿如鹽酸、硝酸、濃氨、二乙胺等蒸氣顯色。

(2).試劑顯色法：常用噴霧法或浸漬法處理，顯色試劑常用硫酸、碘的氯仿溶液、堿性高錳酸鉀溶液、磷鉬酸等。10.色譜的檢視

(1).有色物質：日光下直接觀察或在紫外燈下觀察熒光斑點。

(2).無色物質：

1）在紫外燈下（波長）下觀察化合物本身不同顏色的暗斑或熒光斑點，或顯色后按有色物質進行檢視；

2）在可見光、紫外光下均不顯示，也沒有合適的顯色方法的物質，可在紫外光燈254nm下觀察熒光薄層板上黃色熒光背景上的紫藍色斑點，這是由于化合物減弱了吸附劑中熒光物質的紫外吸收強度引起了熒光的熄滅所致。